Литвинко Н.М. Активность фосфолипаз А2 и С при биохимическом моделировании: монография / Нац. акад. наук Беларуси, Гос. науч. учреждение "Ин-т биоорган. химии." - Минск: Технопринт, 2002. - 349 с.: ил. - Библиогр.: с.315-349. - ISBN 985-464-532-0  Место хранения:   07 | Центральная библиотека Красноярского научного центра СО РАН | Красноярск

Оглавление / Contents

Предисловие научного редактора .................................. 9 Введение ....................................................... 14 Глава 1 ФОСФОЛИПАЗЫ А2 И С - ВАЖНЕЙШИЕ ФЕРМЕНТЫ ТРАНСФОРМАЦИИ ФОСФОЛИПИДОВ ............................ 19 1.1 Липолитические ферменты ................................... 19 1.2 Фосфолипазы А2 ............................................ 22 1.2.1 Общая характеристика и современная классификация ... 22 1.2.2 Особенности взаимодействия ФЛА2 с субстратом ....... 40 1.3 Общая характеристика ФЛС .................................. 62 1.4 Фосфолипазы - универсальный объект для проведения ингибиторного анализа ..................................... 67 Глава 2 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ЛИПОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ - ВАЖНЫЙ ФАКТОР ПРОЦЕССА ВЫДЕЛЕНИЯ ФОСФОЛИПАЗ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ИСТОЧНИКОВ ...... 86 2.1 Общие принципы выделения ФЛА2 и ФЛС из биологических объектов .................................................. 86 2.2 Выделение и очистка фосфолипазы А2 ........................ 89 2.2.1 Выделение и очистка ФЛА2 из поджелудочной железы свиньи по методу Хааса ............................. 90 2.2.2 Модификация метода выделения и очистки ФЛА2 ........ 92 2.2.2.1 Отделение нуклеинсодержащих компонентов на ранних стадиях выделения ФЛА2 ............................. 92 2.2.2.2 Использование аффинных взаимодействий для выделения панкреатической ФЛА2 ............. 93 2.2.2.3 Разделение комплекса ФЛА2 с нуклеинсодержащим, компонентом ............. 95 2.3 Выделение и очистка ФЛС ................................... 97 2.3.1 Выделение и очистка неспецифичной ФЛС Clostridium perfringens ........................................ 97 2.3.2 Выделение и очистка фосфатидилинозит специфичной ФЛС Bacillus cereus ............................... 102 Глава 3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ; КИНЕТИЧЕСКАЯ, ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И СУБСТРАТЫ ФОСФОЛИПАЗ ........................................... 107 3.1 Определение активности фосфолипаз ........................ 107 3.1.1 Использование диффузии ферментов в геле, содержащем субстрат для ингибиторного анализа ФЛА2 и ФЛС ........................................ 110 3.1.2 Применение гемоглобина для определения активности фосфолипазы А2 ......................... 112 3.2 Кинетическая характеристика ФЛА2 поджелудочной железы свиньи и яда змеи Naja naja oxiana при гидролизе природного и синтетического субстратов ................... 116 3.3 Иммунохимическая характеристика препаратов ФЛА2 и ФЛС .... 125 3.4 Субстраты фосфолипаз, получение и свойства ............... 129 Глава 4 МОДЕЛИРОВАНИЕ ФОСФОЛИПОЛИЗА ПРИ УЧАСТИИ ФОСФОЛИПАЗЫ А2 и С В ПРИСУТСТВИИ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СОЕДИНЕНИЙ .... 135 4.1 Фосфолиполиз в условиях предварительной инкубации ФЛА2 и ФЛС с фрагментами субстрата, их аналогами и гомологами ............................................... 135 4.1.1 Выявление методом гель-диффузии потенциальной ингибирующей способности соединений, моделирующих фрагменты субстрата, их аналогов и гомологов ......................................... 137 4.1.2 Кинетика гидролиза фосфатидилхолина панкреатической ФЛА2 в составе смешанных мицелл с тритоном Х-100 в присутствии триметиламина ...... 144 4.2 Фосфолиполиз в условиях предварительной инкубации ФЛА2 с простагландинами и их 9-Ме-,10-Ме-,11-Me-аналогами ..... 152 4.3 Заряд межфазной поверхности и активность фосфолипаз А2 и С ................................................... 172 4.3.1 Гидролиз ФЛА2 фосфолипидов в составе смешанных мицелл с детергентами ............................. 191 4.3.2 Гидролиз ФЛА2 фосфолипидов в виде липосом ......... 194 4.3.3 Гидролиз ФЛС фосфолипидов в составе липосом и смешанных мицелл с детергентами ................... 194 4.4 Упорядоченность фосфолипидов в межфазной поверхности и активность фосфолипаз А2 ................................. 194 Глава 5 МОДЕЛИРОВАНИЕ ФОСФОЛИПОЛИЗА ПРИ УЧАСТИИ ФОСФОЛИПАЗ А2 и С В ПРИСУТСТВИИ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ... 208 5.1 Влияние цитохрома Р-450 как интегрального белка на гидролиз фосфолипидов ФЛА2 ............................... 209 5.1.1 Характеристика цитохрома Р-450 - терминальной оксидазы монооксигеназной системы печени .......... 212 5.1.2 Характеристика протеолипосом, содержащих цитохром Р-450 .................................... 215 5.1.3 Влияние цитрохома Р-450 и цитрохома В5 на гидролиз ФХ и ФГ под действием ФЛА2 ............... 218 5.1.4 Специфичность ФЛА2 к субстрату с разной надмолекулярной организацией ...................... 225 5.2 Влияние периферических и растворимых белков на ферментативный гидролиз фосфолипидов ..................... 231 Глава 6 БИОЛОГИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ФОСФОЛИПАЗ .................... 239 6.1 Липолитические ферменты и апоптоз ........................ 240 6.2 Роль функционирования фосфолипаз в биохимических процессах ................................................ 241 6.2.1 Образование в процессе липолиза жирных кислот и их производных .................................. 242 6.2.2 Образование лизофосфолипидов как результат действия фосфолипаз ............................... 247 6.3 Воздействие продуктов липолиза на ФЛА2 ................... 249 6.3.1 Липолиз двухкомпонентных по липиду липосом с участием фосфолипазы А2 в условиях накопления эндогенного лизофосфатидилэтанола ................. 249 6.3.2 Липолиз фосфатидилхолина в липосомах с участием ФЛА2 в условиях добавления экзогенного лизо-ФХ или эквимолярной смеси лизо-ФХ и γ-линоленовой кислоты ........................................... 252 6.3.3 Влияние жирных кислот и их производных на ФЛА2. ... 253 6.3.4 Влияние процесса мицеллообразования γ-линоленовой кислоты на собственную флуоресценцию ФЛА2 ......... 254 6.3.5 Влияние на активность ФЛА2 фосфохолина и холина ... 255 6.4 Активность эндогенной растворимой фосфолипазы А2 в печени. Взаимосвязь с микросомальной гидроксилирующей системой ................................................. 257 6.4.1 Влияние на активность цитохрома Р-450 гидролиза фосфолипидов микросом под действием экзогенной ФЛА2 .............................................. 261 6.4.2 Влияние продуктов фосфолипазной реакции на активность цитохрома Р-450 ........................ 264 6.4.3 Активность цитохрома Р-450 в присутствии ФЛА2 ..... 264 6.4.4 Активность цитохрома Р-450 в присутствии ФЛС ...... 269 6.5 Взаимосвязь между действием некоторых простаноидов на ФЛА2 и их биологической активностью ...................... 270 6.5.1 Ингибирование активности ФЛА2 простаноидами и установление взаимосвязи с некоторыми проявлениями их биологического действия (гастропротекторная, иммунотропная и противоопухолевая активность) ..................... 271 6.5.2 Взаимосвязь ингибирования активности ФЛА2 простаноидами с их радиопротекторным действием .... 281 Глава 7 ПРИМЕНЕНИЕ ФОСФОЛИПАЗ В КАЧЕСТВЕ МАРКЕРА ДЛЯ БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ........................... 287 7.1 Изучение стабильности модельных липидных мембран при участии ФЛА2 ............................................. 287 7.1.1 Гидролиз ФЛА2 липосом до и после γ-облучения ...... 287 7.1.2 Влияние амидов жирных кислот на катализируемый ФЛА2 гидролиз ФХ в составе мицелл с тритоном Х-100 ............................................. 294 7.2 Изучение устойчивости липосом к ферментативной деградации в зависимости от фосфолипидного состава и белкового окружения .................................... 300 7.3 Фосфолипазы как модель для скрининга эффекторного действия соединений различного химического строения ...... 307 Заключение .................................................... 313 Литература .................................................... 315